基于GenoLab M的(de)全基因組測序揭示假單胞菌降解全氟羧酸的(de)生物學(xué)機制
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2024-02-06
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基于GenoLab M的(de)全基因組測序揭示假單胞菌降解全氟羧酸的(de)生物學(xué)機制



文章(zhāng)梗概

真邁生物用戶俄羅斯科學(xué)院烏法聯邦研究中心在國際期刊——toxics上發表題為(wèi)“Biodegradation Potential of C7-C10 Perfluorocarboxylic Acids and Data from the Genome of a New Strain of Pseudomonas mosselii 5(3)”的(de)研究成果。研究者從殺蟲劑(含氟化物)污染的(de)土壤中分離(lí)到一(yī)株假單胞菌Pseudomonas mosselii 5(3),并發現其對C7-C10的(de)全氟羧酸perfluorocarboxylic acids (PFCAs)具有降解潛能,随後通過GenoLab M測序儀完成了該菌株的(de)基因組測序,發現其基因組全長(cháng)為(wèi)5.6 Mb,含有5134個基因,其中有4個基因編碼的(de)酶,參與氟化物的(de)降解。此外,唯一(yī)碳源(各種C7-C10的(de)全氟羧酸)培養實驗和(hé)LC-MS分析也驗證了該假單胞菌降解全氟羧酸的(de)潛能。


背景介紹

全氟羧酸的(de)主要代表是全氟辛酸和(hé)全氟辛烷磺酸,它們穩定性高(gāo),廣泛用于殺蟲劑生産、織物保護劑、食品外包裝、電鍍及滅火器的(de)泡沫成分。這類化合物在生物體內(nèi)易累積,難降解,不僅會毒害野生動物,對人體也有毒副作用,如(rú):誘發各種腫瘤,引起免疫系統和(hé)肝髒紊亂,影響胎兒發育及生殖功能。随着人類的(de)大量使用,在水體與土壤等環境中,全氟羧酸被廣泛檢出。因此,開發有效的(de)技術來分解全氟羧酸類化合物已迫在眉睫。


當前,分解全氟羧酸類化合物的(de)常規手段,包括化學(xué)處理(lǐ)、高(gāo)溫焚燒和(hé)超聲波技術。然而,這些方法既昂貴又低(dī)效,無法取得令人滿意的(de)結果。因此,生物降解技術,尤其是基于微生物的(de)全氟羧酸化合物降解技術就提上了日程,而目前許多研究發現,假單胞菌具有降解有機氟化合物的(de)能力。


*以下為(wèi)該研究成果解讀


結果概要


01 菌株的(de)種屬鑒定與基因組功能注釋

基于生理(lǐ)與生化實驗的(de)一(yī)系列結果及16S rRNA的(de)分析,菌株被歸屬到假單胞菌Pseudomonas。選取屬內(nèi)代表菌株,基于全基因組分析結果,被分類到Pseudomonas mosselii (圖1A)。對P.mosselii 5(3)二代測序,組裝得到的(de)基因組全長(cháng)5,676,241 bp,GC含量64.38%。菌株P.mosselii 5(3)含有5134個基因,其中56.8%的(de)基因功能能被KEGG數據庫注釋,尤其是外源物質生物降解與代謝“Xenobiotics biodegradation and metabolism”這個分類中有超過60個功能基因,它們主要參與降解各種芳香族化合物(乙苯、硝基甲苯、二甲苯、苯乙烯、萘、多環芳烴、氨基苯甲酸酯、二惡英等)。此外,在基因組中還發現了可(kě)能參與全氟羧酸脫羧和(hé)脫羰基化的(de)酶的(de)編碼基因,如(rú)參與氟化物脫鹵過程的(de)鹵烷脫鹵酶基因(dhaA)和(hé)鹵乙酸脫鹵酶H-1基因(dehH1)

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02 在C7-C10全氟羧酸生長(cháng)表現

細菌為(wèi)了在全氟羧酸上生長(cháng),需要将其運輸到細胞中,合成一(yī)種能夠斷裂C-F鍵的(de)高(gāo)效酶,并識别有毒的(de)氟離(lí)子(zǐ),随後将其從細胞中排出。本研究發現:以上的(de)障礙對于P.mosselii 5(3)都不是問題,因為(wèi)它能夠在以C7-C10 全氟羧酸作為(wèi)唯一(yī)碳源的(de)礦物培養基上良好生長(cháng),而6-7天後,其生物量達到峰值。


03 解析C7-C10全氟羧酸的(de)降解途經

全氟羧酸的(de)生物降解可(kě)能包括多個步驟:脫羧、羟基化和(hé)脫氟。LC-MS檢測了菌株以全氟羧酸為(wèi)碳源生長(cháng)的(de)培養液的(de)代謝物,采用離(lí)子(zǐ)交換色譜檢測氟離(lí)子(zǐ),并結合基因組中編碼參與脫羧、羟基化和(hé)脫氟反應的(de)酶,繪制出下圖所示的(de)生物降解途徑。

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結論

1. 菌株P.mosselii 5(3)分離(lí)自(zì)殺蟲劑污染的(de)土壤,首次報道(dào)了它能降解C7-C10全氟羧酸。

2. 菌株的(de)基因組測序發現了之前未在微生物中報道(dào)的(de)基因,包括氟化合物降解關鍵的(de)酶或蛋白,如(rú)鹵烷脫鹵酶基因、鹵乙酸脫鹵酶H-1基因、氟離(lí)子(zǐ)轉運基因和(hé)烷磺酸單加氧酶基因。

3. LC-MS分析結果表明,轉化是由全氟己酸引起的(de),伴随氟離(lí)子(zǐ)的(de)釋放。

4. 菌株P.mosselii 5(3)在分子(zǐ)層面上證實具有分解C7-C10 全氟羧酸的(de)高(gāo)潛力,該項研究将有助于探索菌株在降解全氟羧酸的(de)細胞生物學(xué)過程和(hé)相關生物技術的(de)開發,以恢複受有機氟化物污染的(de)環境。


參考文獻

Chetverikov S, Hkudaygulov G, Sharipov D, et al. Biodegradation Potential of C7-C10 Perfluorocarboxylic Acids and Data from the Genome of a New Strain of Pseudomonas mosselii 5 (3)[J]. Toxics, 2023, 11(12): 1001.


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